طراحی، ساخت و ارزیابی بیان پلاسمید نوترکیب pires-igk/mil۱۸/fc با هدف استفاده در مطالعات واکسن
نویسندگان
چکیده
هدف: اینترلوکین 18 سایتوکاینی است که نقش مهمی در پاسخ سلولهای t کمکی نوع یک بازی میکند و بنابراین پلاسمید بیان کننده آن، بهعنوان یک ادجوانت قوی ژنتیکی در زمینه مطالعه واکسنهای dna بهشمار میرود. در این مطالعه پلاسمید جفت بیانی کد کننده اینترلوکین 18، ترشحی (و بهصورت متصل با قسمتی از fcγ2a) ساخته شد و بیان این سایتوکین نوترکیب ارزیابی شد. مواد و روشها: rna از سلولهای تحریک شده طحال موش استخراج و با استفاده از rt-pcr قطعات cdna متعلق به اینترلوکین 18 موشی (mil-18) و بخشی از توالی fcγ2a ساخته شد. در ادامه به منظور ساخت قطعه mil-18/fc ابتدا قطعات fc و اینترلوکین 18 موشی در پلاسمید psl1180 وارد شده و سپس این قطعه در پلاسمید psectag2a به منظور اضافه شدن توالی نشانه کاپای ایمنوگلبولین (igk) کلون شد. در نهایت igk/mil-18/fc درمیان سایت آنزیمی nhei/xmai، پایین دست ناحیه پروموتوری سیتومگالوویروس، در ناقل pires2-egfp کلون و پلاسمید pires-igk/mil-18/fc ساخته شد. سپس این پلاسمید در رده سلولی hek293t بهوسیله محلول ترانسفکشن توربوفکت ترانسفکت شده و بیان آن با روش الایزا ارزیابی شد. نتایج: بررسی هضم آنزیمی پلاسمیدهای psl-mil-18، psl-mil-18/fc، psec-mil-18/fc و pires-igk/mil-18/f، با استفاده از آنزیمهای اختصاصی مورد استفاده در کلونینگ، منجر به جداسازی قطعات مورد انتظار شد و سپس درستی ترادف و قالب بیان پلاسمید pires-igk/mil-18/f با روش توالییابی تأیید شد. علاوه بر این بیان و ترشح سایتوکین نوترکیب در محلول رویی سلولهای ترانسفکت شده hek293t در مقایسه با کنترل ترانسفکت تأیید شد. نتیجهگیری: در حالیکه پلاسمید pires-igk/mil-18/fc قابلیت کلونینگ و بیان آنتیژن مد نظر را داشته، همچنین قابلیت بیان پروتئین اینترلوکین 18 را بهعنوان یک ادجوانت قوی ژنتیکی را بههمراه دارد. این نتایج در طراحی یک واکسن dna کارا بهمنظور ارتقای پاسخ ایمنی سلولی مفید بوده و علاوه بر این هدفی جدید در راستای دستیابی به نسل جدید از واکسن dna بهحساب میآید.
منابع مشابه
طراحی وساخت پلاسمید نوترکیب pipigfp با قابلیت بیان ویریونهای hiv-1 به عنوان حامل واکسن
چکیده: ویروس نقص ایمنی انسان (hiv ) از خانواده رتروویریده و عامل سندرم نقص ایمنی اکتسابی(aids) می باشد. تهدیدی که عفونت hiv برای نظام سلامت جهانی ایجاد کرده باعث شده است که مطالعه برای دستیابی به ترکیبات ضد ویروسی جدید و همچنین طراحی و تولید واکسن hiv اهمیت ویژه ای پیدا کند. در این زمینه، استفاده از وکتورهای لنتی ویروسی با توان محدود همانندسازی(scr)، ممکن است نگرانیها را دررابطه با ایمنی زیستی...
15 صفحه اولساخت ویریونهای HIV با قابلیت یک سیکل تکثیر با هدف مطالعات ویروس‌شناسی و واکسن
زمینه و هدف : ویروس نقص ایمنی انسان (HIV) از خانواده رتروویریده و عامل سندرم نقص ایمنی اکتسابی (AIDS) می‌باشد. تهدیدی که عفونت HIV برای نظام سلامت جهانی ایجاد کرده؛ باعث شده است که مطالعه برای دستیابی به ترکیبات ضدویروسی جدید و همچنین طراحی و تولید واکسن HIV اهمیت ویژه‌ای پیدا کند. این مطالعه به منظور ساخت ویریونهای HIV با توان یک سیکل همانندسازی با نام (Single Cycle Replicable) با استفاده از ...
متن کاملطراحی و ساخت پلاسمید نوترکیب حاوی ترکیب ژن‌های Ag85B و TB10.4 مایکوباکتریوم توبرکولوزیس
Background & Aims: Tuberculosis (TB), caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb), remain as a leading causes of mortality among infectious diseases. The only current vaccine, bacillus Calmette-Gue´rin (BCG), displays highly variable efficiency for preventing tuberculosis. Thus, identification of protective antigens could be mentioned for designing new vaccines. Among different Mtb antigens,...
متن کاملطراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری
Background: Rabies is an acute encephalitis that causes more than 60,000 deaths worldwide. The only way to save individuals bitten by a rabies-infected animal is the timely use of effective vaccines. Treatment with new generation vaccines is expensive. Therefore, there is a global movement towards the production of less expensive vaccines which retain and improve upon the quality and effectiven...
متن کاملساخت ویریون های hiv با قابلیت یک سیکل تکثیر با هدف مطالعات ویروس شناسی و واکسن
زمینه و هدف : ویروس نقص ایمنی انسان (hiv) از خانواده رتروویریده و عامل سندرم نقص ایمنی اکتسابی (aids) می باشد. تهدیدی که عفونت hiv برای نظام سلامت جهانی ایجاد کرده؛ باعث شده است که مطالعه برای دستیابی به ترکیبات ضدویروسی جدید و همچنین طراحی و تولید واکسن hiv اهمیت ویژه ای پیدا کند. این مطالعه به منظور ساخت ویریون های hiv با توان یک سیکل همانندسازی با نام (single cycle replicable) با استفاده از ...
متن کاملطراحی و ساخت نانو زیست ذرات فاژی نوترکیب به عنوان کاندیدای حامل واکسن ژنی- خوراکی
Background and Objective : Bacteriophage vectors recently have been considered as a gene transfer and vaccine delivery vehicles chiefly due to their low cost, safety, and physical stability. Since, little is known about phage mediated gene transfer in mammalian hosts, A group of invitro experiments were performed to ascertain gene transfercapability of these vehicles . Materials and Methods...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
پژوهش های آسیب شناسی زیستیجلد ۱۴، شماره ۲، صفحات ۱۳-۲۳
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023